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Plate-forme de microscopie - microscopie biphotonique

BvdS, Responsable IBISA Plateformes de Microscopie GIN

Les missions

La plateforme de microscopie optique intravitale de l’institut des Neurosciences de Grenoble fait partie d’une plateforme de microscopies optique et électronique pour l’imagerie cellulaire et sub-cellulaire. En collaboration avec l’équipe MOTIV du laboratoire de spectrométrie physique (LSP, CNRS UMR 5588), elle a comme mission de développer et de valider des techniques de microscopie sur des animaux vivants et des tranches de tissus. La plateforme permet de faire le lien entre l’imagerie cellulaire classique et l’imagerie médicale.

Les projets de recherches s’articulent autour de 2 axes principaux :

  • la neurobiologie et
  • la neuro-oncologie.

Pour ces deux axes de recherches, la plateforme développe des modèles animaux pour la microscopie intracérébrale et/ou des protocoles d’imagerie sur tranches de cerveau vivantes.

Autres liens

Pages avec photos + film presentation PF

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Colorants pour deux photons

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Techniques utilisées

Les équipements et matériels

La plateforme est composée de plusieurs salles regroupées dans un même lieu:

Dans la salle de microscopie optique non-linéaire intravitale:

Nous disposons de deux microscopes multiphotons pour la microscopie optique non linéaire intravitale : l’imagerie à deux photons et l’imagerie par génération de second harmonique (SHG). La profondeur de pénétration dans le cerveau varie entre 400 et 800 μm et dépend entre autre de l’age et de l’espèce : rat ou souris.

Les deux microscopes (ci-dessous) sont couplés à un laser Ti:Sapphire infra-rouge pulsé (Cohérent Chameleon Ultra II) qui permet une gamme de longueurs d’onde d’excitation comprise entre 680 et 1080 nm.

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Un microscope droit LaVision Biotech (trim scope II Single beam) pour les travaux sur tranches de tissus vivantes et perfusées.

  • Le microscope permet également de faire du FLIM (Fluorescence Lifetime Imaging) et
  • du Fast Targeted Path Scanning pour l’imagerie calcique des réseaux de neurones et/ou astrocytes par exemple.

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Un microscope droit ZEISS LSM 7 MP pour les travaux sur des animaux vivants.

  • 3 PMT en épicollection  (et 2 PMT en transcollection) permettant l’acquisition de 3 longueurs d’onde d’émission différentes
  • Acquisition d’images en 3D in vivo
  • Possibilité de suivi au cours du temps avec acquisition à intervalle régulier
  • Possibilité de faire du FRAP

Nous avons également un poste d’anesthésie gazeuse (isoflurane, air et O2) et des arrivées de CO2 et de Carbogène (5 % CO2 et 95 % O2) sont également présentes.

Nous possédons un système de monitoring permettant un suivi des paramètres physiologiques (Saturation de l’Hb en O2, fréquence cardiaque, rythme respiratoire) de l’animal lors des manipulations sous anesthésie

Dans la salle de microscopie confocale

La plateforme propose aussi un microscope confocal fibré (CellVizio 488) pour l’endoscopie (voir l’imagerie cérébrale profonde) à l’échelle cellulaire.

La longueur d’onde d’excitation est fixée à 488 nm. Nous n’avons pour l’instant qu’un seul type de bundle de fibres optiques pour l’imagerie cérébrale profonde avec un diamètre externe de 300 μm.

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Dans la salle de Chirurgie

La préparation des animaux (pose de cathéter, craniotomie…) et des tranches de tissus, se fait dans une salle de (micro)-chirurgie. Cette salle dispose d’un poste d’anesthésie gazeuse (isoflurane, air et O2), d’un équipement complet (macroscope, fraise dentaire…) pour la réalisation de craniotomie, d’un vibromicrotome en présence de carbogène pour faire des tranches de cerveau.

Une paillasse permet la préparation des colorants et autres solutions grâce à une balance de précision, une centrifugeuse, un pH-mètre...

Mise à disposition de matériel d'imagerie

Une séance d'essai est proposée afin d'évaluer l'adéquation du matériel à vos besoins. Une fois cette séance validée, et afin de pouvoir utiliser le matériel, vous devez suivre une formation à l'utilisation du système choisi, le but étant de devenir autonome sur l’appareil.

Vous trouverez les tarifs appliqués selon la prestation voulue et votre statut sur ce site.

Nous vous proposons une petite introduction à l’utilisation d’image J (freeware) pour le traitement et l’analyse des images.

Prestation Ingénieur

Les utilisateurs qui souhaitent bénéficier des ressources de la plateforme d’imagerie optique à titre ponctuel sont invités à contacter le responsable pour une prestation de service avec l’assistance d’un ingénieur. Vous trouverez les tarif appliqués selon la prestation voulue et votre statut sur ce site.

Formations

3 fois par an, nous organisons une formation sur deux jours à l’utilisation d’image J, en collaboration avec Yves Usson.

Lien utiles